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一.MLPA简介 |
MLPA®
高效灵敏的基因组和甲基化分析方法 |
多重连接依赖探针扩增(Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification, MLPAÒ)能够在一个简单的反应内检测多达50个核酸序列的拷贝数变化,因此能够检测大量基因的缺失和重复,MLPA还可用于血液和肿瘤组织样品的DNA和mRNA谱的检测,并可分析甲基化。迄今,MLPA已经公认为一种可靠和有效的方法,自2002年首次报道以来,该技术已在全球的900多家实验室得以应用,使用该技术发表的论文已近千篇。
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二.MLPA原理:基因捕获+PCR+毛细管电泳分离。 |
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三.MLPA®的应用领域 |
- 小范围基因重组的检测:已检测的基因包括BRCA1, BRCA2, MSH2, MLH1, DMD, APC, SMA, NF1, NF2, VHL, TSC1/2, MECP2, NSD1, LDLR, FBN1, CFTR, DPYD, COL5A1, CACNA1A, PKHD1, BRIP1, SLC26A4, LMN1B, PRSS1, FRMD7, TPMT, FLCN, DNAI1, EP300, DNAH5, UBE3A, PCCA, PCDH15 等;
- 大范围基因重组的检测:已检测的疾病类型包括:Williams syndrome, Prader-Willi/ Angelman syndrome, DiGeorge syndrome, Cri du Chat, Pelizaeus-Merzbacher, CMT1, HNPP等;
- 亚端粒区域的拷贝数变化;
- 染色体非整倍体(包括羊水细胞样品);
- 肿瘤诊断:如ALL, CLL, oligodendrogliomas, melanomas, neuroblastomas的DNA拷贝数变化;
- 甲基化定量检测:涉及的疾病包括Prader-Willi/Angelman, Beckwith Wiedemann, MGMT, MLH1, Fragile X 以及抑癌基因的失活。
- mRNA 分析:涉及细胞凋亡和炎症反应。
目前MRC-Holland供应的SALSA® MLPA®试剂盒已多达400多个品种,而且通过与全球科学家的合作,新品种正在源源不断地开发出来。 |
四.MLPA技术和其他技术比较: |
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MLPA |
普通PCR、Q-PCR |
MMCA |
测序 |
基因芯片 |
检测重数 |
单管多达50重 |
单重或少数几重 |
多种荧光标记,单管可达10-20重 |
全序列检测 |
重数灵活,可根据实际需要定。 |
通用性 |
需一台普通PCR仪及一台一代测序仪 |
一台对应PCR仪器 |
多种PCR仪均可用 |
需一代测序仪 |
一般需要专门仪器 |
技术优势 |
检测序列的拷贝数变化或已知点突变;可区分杂合缺失或重复 |
检测片段的缺失或图突变,方便自行设计 |
适合检测基因点突变;可区分纯合或杂合突变。 |
全序列测序;可检测已知/未知突变或缺失重复等 |
可检测基因缺失或点突变 |
技术劣势 |
不适合用于点突变检测 |
无法准确检测拷贝数变化。 |
无法准确检测拷贝数变化。 |
一代测序无法检测基因重复 |
无法检测基因重复及未知突变 |
准确性 |
体系内体系间对比,不会出现假阳性 |
定量实验影响因素多 |
有特异的Tm值,不会出现假阳性 |
金标准 |
判读时存在信号强弱无法区分的问题 |
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典型数据 |
1. 正常: |
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2. 完全缺失: |
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3. 重复: |
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4. 杂合缺失 : |
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